導讀：
關注常規(guī)分析研究實驗中出現(xiàn)問題的深層次原因，通過實驗驗證并解決問題，建立最優(yōu)檢測方法。
摘要：
DMSO在酸性條件下，頂空加熱至80℃以上易分解為甲硫醚、二甲基二硫醚和甲硫醇。建立鹽酸鹽類原料藥的殘留溶劑檢測方法時，選用頂空進樣方法測定時應避免使用二甲基亞砜（DMSO）做稀釋劑，可選用水、N，N-二甲基甲酰胺等做稀釋劑，可有效避免引入雜質峰干擾測定。
DMSO在酸性條件下加熱的反應機理
方法建立背景：
我公司在檢測某鹽酸鹽類原料藥殘留溶劑時，按質量標準采用頂空進樣法測定（稀釋劑為二甲基亞砜），記錄的氣相色譜圖（圖1）中出現(xiàn)較大未知雜質峰（非合成過程中引入溶劑種類）。
圖1 鹽酸鹽原料藥1號供試品GC色譜圖
原因排查：
1）文獻查詢
查詢二甲基亞砜穩(wěn)定性相關文獻，報道二甲基亞砜在酸性條件下高溫加熱會發(fā)生分解，分解產物主要是甲硫醚（沸點38℃）、二甲基二硫醚（沸點109℃）和甲硫醇（沸點123℃）。
匯總《中國藥典》2020年版二部收載的所有鹽酸類品種的殘留溶劑檢測方法（見表1），共收載了37個有殘留溶劑檢測項目的鹽酸鹽品種質量標準，采用稀釋溶劑為N，N-二甲基甲酰胺的有13個、采用水為稀釋劑的有12個，采用二甲基亞砜為稀釋劑的有12個。有匯總結果可見約1/3品種采用二甲基亞砜做稀釋劑（頂空平衡溫度為80~100℃，平衡時間為20-30min）。說明鹽酸鹽類品種的氣相實驗條件選擇二甲基亞砜為稀釋劑是較為普遍的現(xiàn)象，但是是否“存在即合理”呢？這些品種檢測過程是否出現(xiàn)過較大未知雜質峰，所選方法是否是最優(yōu)方法呢？讓我們繼續(xù)一探究竟。
2）實驗驗證
調查公司其他在研鹽酸鹽類品種的殘留溶劑檢測圖譜，發(fā)現(xiàn)另外兩個鹽酸鹽品種的供試品氣相色譜圖中（詳見圖2和圖3），均出現(xiàn)未知雜質峰。而對應的對照品和空白溶劑中均無該未知雜質峰，初步分析二甲基亞砜在酸性條件下80℃（常規(guī)頂空溫度）時即可能發(fā)生分解。
圖2 鹽酸鹽原料藥2供試品GC色譜圖
圖3 鹽酸鹽原料藥3供試品GC色譜圖
推測該未知雜質由DMSO在酸性加熱條件反應產生，設計實驗證實：
② 稱取鹽酸鹽原料藥1約500mg，加10ml二甲基亞砜溶解后，測得pH為2.2。
②量取二甲基亞砜約10ml，用鹽酸調節(jié)pH至2.2，精密量取1ml，置頂空瓶中，70℃平衡25min頂空進樣，記錄氣相色譜圖（見圖4），由圖可見，在RT9.405min處出現(xiàn)與圖3供試品相同的未知雜質峰。另取2ml進行GC-MS分析，根據(jù)結構推測9.4min和12.8min雜質分別為二甲基甲硫醚和甲硫醇。
圖4 DMSO酸性條件下80℃頂空平衡25min進樣的GC色譜圖
小結：經上述實驗驗證結果可知，二甲基亞砜在酸性條件下頂空常規(guī)條件下進樣會發(fā)生分解，生成甲硫醚、二甲基二硫醚和甲硫醇等雜質。鹽酸鹽類品種采用頂空法測定時應避免使用二甲基亞砜做稀釋劑。
方法改善：
取鹽酸鹽品種2和3樣品適量，分別將稀釋劑更換為50%N，N-二甲基甲酰胺和N，N-二甲基甲酰胺，其他色譜條件不變，頂空進樣，記錄色譜圖（圖5和圖6），由圖可見，未出現(xiàn)其他雜質峰。經方法學驗證，方法專屬性強、準確性高，重現(xiàn)性好。
圖5 更換50%DMF為稀釋劑的鹽酸鹽品種1的GC色譜圖
圖6 更換50%DMF為稀釋劑的鹽酸鹽品種2的GC色譜圖
其他注意事項小結：
1、鹽酸鹽類物料采用DMSO作溶劑時，應避免加熱；在加熱條件下，DMSO會與鹽酸鹽發(fā)生反應產生雜質；頂空加熱至80℃左右即會發(fā)生反應產生雜質；
2、更換DMF作溶劑可改善此現(xiàn)象；但是有的鹽酸類原料藥在DMF中的溶解性不滿足測定要求時，可采用一定比例的DMF：水的混合溶液做溶劑。
3、藥典上約1/3鹽酸鹽品種采用水做稀釋劑，純水做溶劑會影響部分待測溶劑（比如甲醇）峰形。
附表：
附表1 Ch P二部鹽酸鹽品種殘留溶劑檢測信息匯總表
|
編號 |
名稱 |
溶解度 |
溶劑 |
殘留溶劑 測定法 |
頂空平衡溫度 及時間 |
溶劑種類 |
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1 |
鹽酸乙哌立松 |
在水中或甲醇中易溶 |
N，N-二甲基甲酰胺 |
頂空法 |
70℃ 15min |
丙酮、異丙醇、三氯甲烷 |
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2 |
鹽酸文拉法辛 |
在水中易溶，在乙醇中溶解。 |
50% N，N-二甲基甲酰胺溶液 |
頂空法 |
80℃ 30min |
甲醇、乙醇、乙醚、丙酮、異丙醇、二氯甲烷、正己烷、乙酸乙酯、四氫呋喃、環(huán)己烷、甲苯。 |
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3 |
鹽酸艾司洛爾 |
在水中易溶，在乙醇或三氯甲醇中易溶，在乙酸乙酯中極微溶解。 |
N，N-二甲基乙酰胺 |
直接進樣法 |
/ |
甲醇、乙醚、乙酸乙酯、甲苯 |
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4 |
鹽酸頭孢甲肟 |
在甲酰胺中易溶，在甲醇中微溶，在水中極微溶解，在乙醇中不溶。 |
N，N-二甲基甲酰胺 |
頂空法 |
80℃ 30min |
四氫呋喃、二氯甲烷、乙醇、乙酸乙酯 |
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5 |
鹽酸多巴酚丁胺 |
在水或無水乙醇中略溶，在三氯甲烷中幾乎不溶 |
N，N-二甲基甲酰胺 |
直接進樣法 |
/ |
苯、丙酮 |
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6 |
鹽酸安非他酮 |
在水、甲醇或乙醇中易溶，在乙酸乙酯中幾乎不溶 |
N，N-二甲基甲酰胺 |
頂空法 |
80℃ 30min |
乙腈、二氯甲烷、三氯甲烷 |
|
7 |
鹽酸克林霉素磷酸酯 |
在乙醇中易溶，在水中溶解 |
N，N-二甲基甲酰胺 |
頂空法 |
90℃ 30min |
乙醇、乙酸乙酯、丙酮、乙腈、二氯甲烷、三氯甲烷 |
|
8 |
鹽酸阿米替林 |
在水、甲醇、乙醇或三氯甲烷中易溶。 |
N，N-二甲基甲酰胺 |
直接進樣法 |
/ |
甲苯、四氫呋喃、異丙醇 |
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9 |
鹽酸納美芬 |
在水或甲醇中易溶，在乙醇中溶解，在丙酮中極微溶解 |
N，N-二甲基甲酰胺 |
頂空法 |
80℃ 30min |
丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯、四氫呋喃 |
|
10 |
鹽酸舍曲林 |
在甲醇或乙醇中溶解，在水中幾乎不溶 |
N，N-二甲基甲酰胺 |
頂空法 |
80℃ 30min |
甲醇、乙醇、乙酸乙酯、四氫呋喃、異丙醇、正丁醇 |
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11 |
鹽酸氟西汀 |
在甲醇或乙醇中易溶，在水或三氯甲烷中微溶。 |
N，N-二甲基甲酰胺 |
頂空法 |
90℃ 40min |
甲醇、乙腈、正己烷、乙酸乙酯、甲苯 |
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12 |
鹽酸維拉帕米 |
在甲醇、乙醇或三氯甲烷中易溶，在水中溶解。 |
N，N-二甲基甲酰胺 |
頂空法 |
90℃ 30min |
乙醇、丙酮、苯甲醛、二甲基亞砜、甲苯、三氯甲烷 |
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13 |
鹽酸氮卓斯汀 |
在甲醇中略溶，在水或乙醇中微溶，在冰醋酸中溶解 |
50% N，N-二甲基甲酰胺 |
頂空法 |
85℃ 15min |
甲醇、乙醇、異丙醇、丙酮、 二氯甲烷 |
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14 |
鹽酸二甲弗林 |
在水中易溶，在乙醇中溶解，在乙醚中幾乎不溶 |
水 |
頂空法 |
80℃ 30min |
無水乙醇 |
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15 |
鹽酸川芎嗪 |
在水中易溶，在乙醇和三氯甲烷中溶解 |
水 |
頂空法 |
80℃ 30min |
丙酮 |
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16 |
鹽酸丙帕他莫 |
在水中易溶，在乙醇中微溶，在丙酮幾乎不溶。 |
水 |
頂空法 |
80℃ 30min |
甲醇、乙醇、丙酮、二氯甲烷 |
|
17 |
鹽酸左布比卡因 |
在乙醇中易溶，在水中溶解，在三氯甲烷中微溶。 |
水 |
頂空法 |
80℃ 30min |
異丙醇 |
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18 |
鹽酸頭孢吡肟 |
在水中或甲醇中易溶，乙醇中微溶。 |
水 |
頂空法 |
70℃ 30min |
甲醇、丙酮 |
|
19 |
鹽酸米多君 |
在水中溶解，在甲醇中略溶，在丙酮或乙醚中幾乎不溶，在乙酸乙酯中不溶。 |
水 |
頂空法 |
80℃ 30min |
甲醇、乙腈 |
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20 |
鹽酸阿普林定 |
在三氯甲烷中極易溶解，在水或乙醇中易溶 |
水 |
頂空法 |
80℃ 45min |
乙酸乙酯 |
|
21 |
鹽酸阿糖胞苷 |
在水中極易溶解，在乙醇中略溶，在乙醚中幾乎不溶 |
水 |
頂空法 |
80℃ 30min |
甲醇、乙醇 |
|
22 |
鹽酸表柔比星 |
在水或甲醇中溶解，在乙醇中微溶。 |
水 |
頂空法 |
80℃ 30min |
乙醇、丙酮、二氯甲烷 |
|
23 |
鹽酸環(huán)丙沙星 |
在水中溶解，在甲醇或乙醇中極微溶解，在丙酮、乙酸乙酯或二氯甲烷中幾乎不溶 |
水 |
頂空法 |
90℃ 30min |
甲苯、乙醇 |
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|||
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24 |
鹽酸曲馬多 |
在水中極易溶，在乙醇或三氯甲烷中易溶，在丙酮中微溶。 |
水 |
頂空法 |
90℃ 30 min |
異丙醇，二氧六環(huán) |
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25 |
鹽酸曲美他嗪 |
在水中極易溶解，在冰醋酸中易溶，在甲醇中溶解，在乙醇中略溶。 |
水 |
頂空法 |
60℃ 45 min |
無水乙醇、二氯甲烷、三氯甲烷、甲苯 |
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26 |
鹽酸二氫埃托啡 |
在甲醇中溶解，在水中或乙醇中微溶 |
二甲基 亞砜 |
頂空法 |
100℃ 30min |
甲醇、乙醇、乙醚、苯 |
|
27 |
鹽酸托烷司瓊 |
在水中易溶，在甲醇中略溶，在乙醇中微溶，在三氯乙烷中幾乎不溶。 |
90%二甲基亞砜 水溶液 |
頂空法 |
85℃ 25 min |
正己烷、四氫呋喃、甲醇、二氯甲烷、乙醇、三氯甲烷、甲苯、N，N二甲基甲酰胺 |
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28 |
鹽酸司來吉蘭 |
在水、甲醇或乙醇中易溶。 |
二甲基 亞砜 |
頂空法 |
90℃ 30min |
無水乙醇、無水乙醚、甲苯 |
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29 |
鹽酸柔紅霉素 |
在水或甲醇中易溶，在乙醇中微溶，在丙酮中幾乎不溶 |
二甲基 亞砜 |
頂空法 |
80℃ 45min |
甲醇、乙醇、丁醇、丙酮、三氯甲烷 |
|
30 |
鹽酸氨溴索 |
在甲醇中溶解，在水中略溶，在乙醇中微溶。 |
80%二甲基亞砜 |
頂空法 |
80℃ 25min |
甲醇、無水乙醇、丙酮、二氯甲烷，三氯甲烷 |
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31 |
鹽酸特比萘芬 |
在甲醇或乙醇中易溶，在水中微溶或極微溶解，在乙醚中幾乎不溶。 |
二甲基 亞砜 |
頂空法 |
85℃ 30min |
甲醇、乙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、甲苯 |
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32 |
鹽酸伊托必利 |
在水中極易溶解，在甲醇中易溶，在乙醇中略溶，在三氯甲烷中微溶。 |
二甲基 亞砜 |
直接進樣法 |
/ |
三氯甲烷、甲苯 |
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33 |
鹽酸多柔比星 |
在水中溶解，在甲醇中微溶。 |
二甲基 亞砜 |
頂空法 |
90℃ 30min |
甲醇、乙醇、丙酮、二氯甲烷 |
|
34 |
鹽酸齊拉西酮 |
在N，N-二甲基甲酰胺或甲醇中微溶，在二氯甲烷、無水乙醇或水中不溶。 |
二甲基 亞砜 |
直接進樣法 |
/ |
甲醇、乙醇、正己烷、N，N-二甲基甲酰胺、二氯甲烷、甲苯、四氫呋喃 |
|
35 |
鹽酸羅哌卡因 |
在乙醇中易溶，在水中溶解，在乙醚中幾乎不溶。 |
二甲基 亞砜 |
頂空法 |
110℃ 20min |
乙醇、丙酮、異丙酮、三氯甲烷、甲苯、N，N-二甲基甲酰胺 |
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36 |
鹽酸帕羅西汀 |
在甲醇中易溶，在乙醇中溶解，在丙酮中微溶，在水中極微溶解。 |
二甲基 亞砜 |
頂空法 |
90℃ 30min |
甲醇、乙醇、丙酮、四氫呋喃、吡啶、甲苯 |
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37 |
鹽酸法舒地爾 |
在水中易溶，在甲醇中溶解，在乙醇中微溶，在三氯甲烷中幾乎不溶 |
二甲基 亞砜 |
直接進樣 |
/ |
N，N-二甲基 甲酰胺 |
-END-
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110102000668（1）號